多聚糖是由單糖組成的碳水化合物，根據(jù)組成和鍵合位置的不同可排列成多種不同的低聚糖結(jié)構(gòu)。N-糖或 O-糖非還原末端的唾液酸封端可在介導(dǎo)治療性糖蛋白的有效性中發(fā)揮非常重要的作用。根據(jù)分子和應(yīng)用的不同，末端唾液酸可能會降低清除率，降低抗體依賴性細(xì)胞毒性 (ADCC) 活性或具有抗炎作用。

 

在生物治療藥物中發(fā)現(xiàn)的兩種常見唾液酸是 N-乙酰神經(jīng)氨酸（NANA 或Neu5Ac）和 N-羥乙酰神經(jīng)氨酸（NGNA 或 Neu5Gc）。Neu5Ac 通常為主要形態(tài)，而 Neu5Gc 不能由人類合成，它存在于生物治療藥物中使其可能具有免疫原性。因此，對治療性糖蛋白中唾液酸的絕對含量以及不同唾液酸種類的含量的監(jiān)測都至關(guān)重要。

 

靈敏、高通量的唾液酸分析與定量方法？Get！

 

Agilent AdvanceBio 唾液酸分析與定量試劑盒（部件號 GS24-SAP）為唾液酸的分析與定量提供了一種靈敏的高通量方法。通過酸水解從糖蛋白中釋放出唾液酸，然后用熒光團(tuán) 1,2-二氨基-4,5-亞甲基二氧基苯 (DMB) 對其進(jìn)行衍生化，從而可以通過具有熒光檢測 (FLD) 和可選的質(zhì)譜 (MS) 檢測功能的反相 (RP) 液相色譜進(jìn)行分離。

 

檢測優(yōu)勢：

 

– 工作流程（包括溫育期）可在約 5 個小時內(nèi)完成

 

– 1–2000 pmol 的寬唾液酸檢測范圍

 

– 對唾液酸化水平較低的蛋白質(zhì)的檢測靈敏度可達(dá)皮摩爾級

 

規(guī)格：

 

96 孔板形式

 

試劑盒中包括預(yù)分配的 NANA 和 NGNA定量標(biāo)準(zhǔn)品

 

試劑盒中包括唾液酸定性分析參比組合

 

所需的設(shè)備和樣品前處理注意事項

 

AdvanceBio 唾液酸分析與定量試劑盒適用于多種不同的樣品類型，包括糖蛋白、糖肽、糖脂、聚唾液酸以及全細(xì)胞。

 

根據(jù)樣品類型和濃度的不同，可能需要對高度唾液酸化的樣品進(jìn)行稀釋，而對于唾液酸化水平較低的單克隆抗體等樣品則可能需要通過干燥和復(fù)溶于少量去離子水中對其進(jìn)行濃縮。按照推薦的使用方式，該試劑盒包含的試劑足夠用于生成 24 個數(shù)據(jù)點(diǎn)。這足以將 6 個樣品各平行制備三份，或?qū)?9 個樣品各平行制備兩份，更多詳情請參閱說明書。本方法的動態(tài)范圍為 1–2000 pmol 唾液酸/樣品孔。

 

用戶需要提供的設(shè)備包括能夠為所需的溫育步驟提供 50 °C 和 80 °C恒定溫度的熱循環(huán)儀或帶蓋加熱模塊。分析需要使用具有熒光檢測功能的分析型 HPLC 系統(tǒng)（HPLC 或 UHPLC），如需了解更多信息，請參閱說明書。